母猪胚胎存活率受日粮营养水平的影响,部分研究发现高营养水平降低了胚胎成活率,也有相反研究结果报道。胚胎成活率的降低对生产母猪产仔数来说是不利的,而高产母猪并不受影响。相反高胚胎成活率增加了胎儿发育迟缓、平均初生重下降的风险。而且,胚胎的存活率越高,胚胎发育的变异系数越大。
因为子宫着床阶段胚胎死亡率的波动有利于胚胎变异系数的降低(Pope等,1986)。因此,在着床前高产母猪胚胎存活率下降的同时,降低了胚胎早期的变异系数和子宫拥挤,有利于改善仔猪出生性能。本实验旨在研究妊娠第1周高营养水平饲粮对高产母猪胚胎存活率和均匀度的影响。母猪受精后营养和孕酮水平对胚胎的影响已有报道(Den Hartog和van Kempen,1980;Dyck and Strain,1983;Ashworth,1991;Jindal等,1996)。尽管高排卵率对经产老母猪来说容易造成子宫拥挤,但排卵数高达20个甚至以上时,也会限制高产母猪胎盘发育,造成子宫拥挤(Almeida等,2000)。
1、材料与方法
1.1实验动物
30头在产仔数方面经过10代以上品种选育的大白高产母猪(INRA herdNouzilly,France),比一般大白母猪至少多产3头仔猪,黄体数多4个以上。每6头一圈,自然光照,漏缝地板。母猪第1次或第2次发情后(连续18 d)口服烯丙孕素,然后每天2次赶公猪检查母猪的发情迹象(早上9点和下午4点各1次)。发情的第1天定为第0天,人工授精2次,每次每圈使用同一头皮特兰种猪新鲜稀释精液。早上第1次出现站立不动发情现象,8 h后进行第1次人工授精,24 h后进行第2次。当第1次发情是在下午检测到,16h后进行第1次人工授精,第2次8 h后。授精时发情母猪的平均日龄为(227±1)d,活重(133±2)kg。
1.2饲养管理
第1次人工授精后,母猪标准日采食量2 kg,预饲1 d(营养水平:12.5MJ/kg,13.5%CP和0.5%Lys)。然后随机分成2组,一组为高营养水平组,日采食量4 kg,升为原来的2倍(n=15);另一组为对照组,采食量维持不变(n=15),持续7 d。个别收集剩料,最后集中一起脱水称重,计算平均日采食量。7 d后,所有母猪重新回到日采食量2 kg水平。
1.3屠宰测定
妊娠的第26,27和28天在当地屠宰场进行屠宰,因为这一时期母猪刚刚进入着床期(Johnson等,2009),子宫方面还不是胚胎存活率的限制因素(Fenton等,1970)。因此,只有营养因素(排除了潜在的子宫拥挤因素)对高产母猪排卵率有影响。屠宰后立即收集生殖道,称重双侧卵巢,黄体计数称重;分离子宫角和阔韧带,测量子宫长度;从一侧卵巢纵切,收集胚胎。每个胚泡由胚膜包着胚液,精心与子宫内膜分离,然后从胚泡中分离出胚胎,称重,用卡尺测量胚胎长度。最后,计数活胚胎数,死胚胎数(尿囊和羊膜中有黑色液体),以及被吸收胚胎数(胚胎和液体消失)。
1.4数据统计分析
胚胎存活率的计数标准:活胚胎数/黄体数;
着床后胚胎存活率:活胚胎数/总胚胎数;
每窝胚胎重量和长度的平均值和变异系数;
子宫密度:活胚胎数/子宫角长度(m);
每个活胚胎数或黄体可利用空间:子宫角长度(cm)/活胚胎数。
妊娠27 d之前(不管是着床之前,期间和之后)的胚胎存活率与受精率有关,而着床后的胚胎存活率专指附着胎盘的胚胎存活率(大约18-27 d之间)。妊娠27 d基本可以确定宫内发育迟缓(子宫内生长阻滞),统计弱胚胎数,即活胚胎重低于每窝平均值减去两个标准差的重量。全部数据采用SAS(SAS Inst.Inc.,Cary,NC)进行方差分析,模型包括组内和组间效应,某些参数引入黄体数或妊娠年龄的分析变项,P<0.05差异显著,结果显示为平均值±标准误。
2、结果分析
2.1饲粮营养水平对胚胎存活率和发育的影响
高营养水平组2头母猪出现剩料现象,7 d的平均日采食量分别为3.8 kg和3.9 kg,因此屠宰了28头母猪(高营养水平组13头,对照组15头)。从表1可以看出,两组的母猪妊娠率没有差异性(P>0.1),妊娠27 d两组母猪繁殖性状也没差异性。平均排卵数(21.0±0.5)个,波动范围14~27;胚胎存活率85.4%(55%~100%);着床后的胚胎存活率96.7%(77%~100%);平均子宫密度(单位长度子宫角的活胚胎数)为(4.7±1.1)个/m;活胚胎可利用空间为21.3 cm/个,黄体可利用空间18.6 cm/个。结果表明,高产母猪妊娠第1周饲粮营养水平高低对以上指标没有影响,差异不显著。
从表2可以看出,胚胎的平均重量为(0.88±0.17)g,平均长度为(20.6±1.1)mm;每窝胚胎重量和长度的平均变异系数分别为11%和5%;两组间的这些指标都没有差异性。几乎一半的母猪(高营养水平组:6/13,对照组:6/15,P>0.10)都会出现1个弱胚胎。是否出现弱胚胎的母猪无论是在排卵率,活胚胎数还是子宫密度,都没有差异性(P>0.10)。
2.2繁殖参数之间的关系
对2个处理组间的相互关系进行了统计分析,发现营养水平对胚胎性状没有显著影响,从表3可以看出,总体或着床后的胚胎存活率与排卵率或子宫长度没有显著的相关性,与母猪不同的年龄阶段体重(断奶时,150日龄或烯丙孕素治疗结束时,表3数据未显示)和其他胚胎性状平均值都没有显著的相关性。妊娠27 d活胚胎数与排卵率正相关,与胚胎重量和大小无关。平均胚胎重与妊娠时间显著相关(r=0.67,P<0.001),平均胚胎长度与子宫长度负相关,与子宫密度正相关。胚胎重量或长度的变异系数与排卵率,总胚胎数,子宫密度和胚胎存活率不存在显著相关性。
3、讨论
人工授精后第1周饲粮营养水平对高产母猪妊娠30 d胚胎存活率没有影响。一般交配后高营养水平对胚胎存活率的不利影响可能由于循环中孕激素浓度的降低所导致(DenHartog和v a n K e m p e n,1 9 8 0;D y c k和Strain,1983;Jindal等,1996;De等,2009)。
首先,营养水平导致肝血循环速度发生变化,从而改变猪代谢过程中孕酮的清除速度(Prime和Symonds,1993;Mille等,1999),交配后补充孕激素可以提高早期胚胎存活率(Ashworth,1991;Jindal等,1997)。和低营养水平饲粮比较,妊娠早期高营养水平降低了孕酮浓度,母猪胚胎存活率随之下降(Jindal等,1997;Virolainen等,2005)。然而,也有报导称交配后饲粮营养水平影响了循环中孕酮水平,胚胎存活率不受影响(Dyck和Kennedy,1995;Ashworth等,1995)。本实验妊娠早期未进行采血以避免产生过多的应激,因此,饲粮营养水平对高产母猪孕酮的影响仍是未知数。就胚胎重量和长度来说,饲粮营养水平(采食量和能量水平)对妊娠早期(9~12 d)母猪胚胎生长及胚胎大小和存活率变异系数没有影响(Ashworth等,1999;Cassar等,1994)。据推测高营养水平通过影响母猪妊娠早期的胚胎存活率,可能进一步影响胚胎发育的变异系数。当营养水平不影响高产母猪胚胎存活率时,胚胎发育的变异系数差异性也体现不出来。
不考虑营养因素,妊娠27 d胚胎存活率与排卵率和子宫角长度也无关,这与以往的研究结果是一致的。妊娠25~30 d母猪子宫容量大小并不是产仔数的限制因素(Fento等,1970);而排卵超过20~22个例外(Blasco等,1996)。Patterson等(2008)指出,对经产母猪来说,排卵率和妊娠27 d胚胎存活率呈负相关。一方面,由于这些母猪平均排卵率高(>22),接近1/3的母猪排卵超过25个;另一方面,Chen和Dziuk(1993)研究发现当子宫可利用空间小于25 cm/CL时,胚胎存活率则受子宫容量大小的影响。虽然本实验高产母猪也出现早期子宫拥挤现象,但胚胎存活率与子宫可利用空间没有相关性。
考虑到本实验都是青年高产母猪,其排卵率高,胚胎存活率能达到85%非常不错了。经产2胎或3胎的母猪平均排卵数为21个,平均胚胎存活率为75%(Patterson等,2008)。Østrup等(2009)调查显示LR×LW高产母猪平均胚胎存活率可达到82%。本实验在妊娠27d后很少发现死胚胎,而子宫着床定植的过程只需要12~25 d(Johnson等,2009),说明妊娠的第1个月大多数胚胎死亡率在着床之前或开始之时发生。由于高的早期胚胎存活率,第27天屠宰时平均活胚胎数达17.5个;但着床稳定完成一般35 d(Chen和Dziuk,1993;Vonnahme,2002)或45~50 d(Foxcroft等,2006)完成,所以并不代表第27天所有的活胚胎数都能存活下来。
妊娠27 d或少于35 d,总胚胎数与胚胎重量和长度无关(Knight等,1977;Patterson等,2008),活胚胎数与胎盘重量成反比关系,意味着子宫拥挤对早期胚盘发育影响高于胚胎发育。高产母猪妊娠35 d后出现子宫拥挤(高产母猪妊娠27 d,窝内胚胎重量变异系数和胚胎存活率无关。尽管着床时胚胎死亡率的波动可以降低弱胎的机率,但对定植后胚胎变异系数影响不确定。此外,实验过程中没有发现与胚胎低死亡率有关因素,因为胚胎存活率和胚胎异质性的关系需要更大规模母猪群和可能需要观察妊娠后期阶段。Quesnel等(2008)研究发现妊娠27 d胚胎重量的变异系数为11%,出生时为21%,说明在胚胎发育的过程中胚胎异质性提高了1倍。最后,研究结果还显示妊娠27 d就可以检测出弱胚胎,与vander Lende等(1990)和Ferguson等(2006)研究结果一致。弱胚胎与排卵率和胚胎可用空间之间并没有关系,而早期发育迟缓更可能是由于卵母细胞质量受损,而不是妊娠早期子宫拥挤。
4、结论
妊娠早期饲粮高营养水平没有降低高产母猪27d胚胎成活率,对胚胎大小和变异系数也不存在利弊性。不考虑营养因素,如果高产母猪出现高的胚胎存活率可能导致胚胎拥挤,对胚盘和胚胎后期阶段的发育带来不利影响。